重组人白细胞介素2(rhIL-2)能够促进活化的T细胞增殖，长期以来被用于体内刺激和维持效应T细胞的生长，并越来越多地用于体外扩增T细胞(包括基因工程CAR-T细胞)，以用于癌症患者的过继细胞治疗。IL-2于1992年被FDA批准用于治疗转移性肾癌，并于 1998年用于治疗转移性黑色素瘤。然而，其批准剂量的使用具有严重的副作用，包括血管毒性。当低剂量给药时，IL-2已被证明可以促进CD4+调节性T细胞(Treg)的选择性激活和扩增，并促进免疫耐受性，且几乎没有全身毒性。最近为改进现有的市售产品如Proleukin(aldesleukin)所做的努力，包括对分子的基因修饰、融合蛋白的开发和低剂量配方的开发。

Akron生产rhIl-2用于体外研究。该产品已用于几种临床和商业的CAR-T疗法中 。此外，该公司还在寻求注册一种新型的、低剂量的rhIL-2制剂，用于治疗异基因造血干细胞移植后的急性和慢性移植物抗宿主病GVHD患者。通过与Dana-Farber癌症研究所的合作研究，证实了Proleukin(aldesleukin)和Akron的rhIL-2的功能上的相似性，支持了该产品在体外使用的实用性。

为了检测IL-2信号转导，在用IL-2进行体外刺激之前，对从健康供体中新鲜分离的PBMC用表面抗体进行染色。洗涤后，细胞在添加2%FBS的预热PBS中，37℃，5%CO2下孵育15分钟，然后用不同浓度的IL- 2，37℃刺激15分钟。刺激后立即用Cytofix固定缓冲液将细胞固定以停止信号转导并进行细胞内标记染色。

淋巴细胞亚群鉴定

CD25, CD122, CD132, CTLA-4, PD-1, PD-L1在各淋巴细胞亚群中的表达

Akron IL-2、Proleukin刺激15min后pSTAT5的表达

Akron IL-2或Proleukin刺激15min后pSTAT5,3,1的表达（n=6）

LC MS (ESI)—表明Akron和Proleukin具有相同的一级结构和正确的二硫键

紫外吸收光谱、圆二色光谱和荧光发射光谱均显示Proleukin和Akron IL-2具有相似的二级和三级结构。

UV

CD

Fluorescence

Proleukin和Akron IL-2的分子量在还原性和非还原性SDS-PAGE下是一致的

总结

1. 用不同浓度的rhIL-2刺激健康供体PBMC 15min，随后用CyTOF进行分析，为不同IL-2产品的功能比较提供了一种方法。

2. 在低浓度的rhIL-2(5-10IU/ml)刺激下，记忆和初始Treg细胞被选择性激活，仅检测到pSTAT5。在高浓度rhIL-2(100-1000IU/ml)刺激下，除CD4+Treg外，CD4+Tcon和CD8+T细胞的记忆亚群也被激活。在所有的T细胞亚群中，IL-2信号通路主要是通过pSTAT5介导的，而不激活STAT1或STAT3。对6个健康供体的结果进行总结，Proleukin和Akron IL-2对T细胞体外刺激无任何差异。

3. 通过质谱、紫外吸收光谱、圆二色光谱、荧光发射光谱、还原性和非还原性条件下SDS-PAGE分析Proleukin和Akron rhIL-2的结构，发现两者的分子量无显zhu差异。

4. 本研究证明Akron的rhIL-2在结构和功能上与Proleukin相似，验证了其用于过继免疫疗法生产的用途，并可能用于治疗免疫炎症性疾病患者。这些应用可能包括治疗移植物抗宿主病(GVHD)和各种自身免疫性疾病。

Akron 细胞因子系列产品

更多产品的DMF以及eCTD MFs文件将完成: rHu G-CSF, rHu GM-CSF, rHu bFGF, rHu SCF, rHu IL-12, rHu IL-18, rHu PDGF-BB, 人AB血清(无动物源， 病毒灭活), 人纤连蛋白溶液(病毒灭活)