介绍

细胞疗法中对新鲜细胞制剂产品时间和辅助资源要求甚高，因此制剂的冻存保护方法被广泛的应用，而且需要加强相关冻存保护的监管活动，尤其是冻存液应用辅料材料的质量和安全性，这也一直是制剂冻存保护的重点关注领域，主要是希望利用优化的冻存液功能，在不需要清洗步骤的前提下安全地注入人体。

美国 BioLife Solutions 公司的HypoThermosol HTS-FRS和CryoStor系列冻存液产品在全球500多个IND中被引用，并已在辅料相关的临床环境中被使用，但支持这些研究的临床前数据的获取通常是保密性质，很难获得二手数据。这主要一方面是因为这些研究成本高昂，其结果为客户提供了竞争优势；另一方面一般如此重要的临床结果在未经第一手的研究来控制相关程序果也是不能通过最终客观的结果审查流程。

针对越来越多国内用户对于Biolife冻存液对于回输人体应用相关的顾虑，今天小编主要分享的这篇研究目的是收集和提供尽可能多的冻存液作为辅料应用的相关定量数据，以便提出和解决当前和未来与系统性给药安全性相关的一系列问题。

01- 研究方法

本研究分为三个阶段，以评估将射Biolife两款冻存液HypoThermosol HTS- FRS (HTS)和CryoStor(分别为含有0%、5%或10% DMSO的CSB、CS5和CS10三个产品)静脉注射到6-8周龄雄性C57BI/6小鼠(每5个一组)的体内安全性(表1)。

表1-注射试验组的分期概况

第一阶段直接冻存液注射-旨在评估冻存液体积和溶液组成的影响;注射250uL和500uL的HTS、CryoStor或对照溶液。对照组为PBS或FHCRC标准冷冻培养基。

第二阶段冻存液+新鲜细胞注射-评估了注射2000万新鲜人脐带血(UCB)细胞悬浮在测试溶液中的安全性。

第三阶段冻存液+冻存细胞解冻后注射-将UCB细胞在测试溶液中冷冻保存，解冻后不清洗直接注射小鼠体内。

为了评估潜在的毒性，在注射前1天（参照组）、注射后30分钟、24小时和7天的尸检中对采集的样本进行了全血计数，且收集器官标本，进行组织病理学检查。

02- 研究结果

阶段一：结果-直接冻存液注射

注射后30分钟、24小时和7天的血液计数表示为参照组的百分比(由虚线表示)，以便所有数据都能以相同的刻度表示。

在每个时间点内，单独注射溶液导致各组之间的血液计数相似。在所有组中，注射后30分钟观察到嗜神经细胞计数立即出现峰值;然而，这些都是24小时后的常态化。7天后，血小板、中性粒细胞和网织红细胞略有升高。500μl CS5组在输注时观察到一例死亡，但最终被认定为与溶液组成无关。

阶段二：结果- 冻存液+新鲜细胞注射

添加新鲜的人脐带血干细胞产生的细胞计数与直接注射冻存液相似。随访7天，所有动物均无死亡，体重均有所增加。

同样在所有组中，嗜神经细胞计数在注射后30分钟立即出现峰值，并在24小时后恢复正常。7天后，血小板、中性粒细胞和网织红细胞略有升高。

阶段三：结果-冻存液+冻存细胞解冻后注射

该阶段评估了冷冻和解冻的人脐带血干细胞免洗直接回输的安全性。将20 × 106个细胞在500μl中冷冻，或在HypoThermosol (HTS)中的相同密度的细胞在4℃下保存过夜。所有溶液均冷注入形式(4°C)。同样在每个输注后时间点，各组之间的血液计数相似，没有死亡，所有动物在7天的随访中体重都有所增加。同样，在所有组中嗜神经细胞计数在注射后30分钟立即出现峰值，并在24小时后恢复正常。7天后仅网织红细胞略有升高。

03- 研究结论

· 只有一个观察到的死亡与溶液成分无关

· 所有动物在7天的随访中体重增加

· 尸检显示所有器官正常

· 在输注后时间点内各组之间的血液计数相似

· 在尸检时血小板，中性粒细胞和网织红细胞计数略有升高

上述研究初步证明了Biolife品牌即用型、无血清和无蛋白的HypoThermosol和CryoStor溶液可作为细胞疗法中直接回输的辅料用途，该发现支持进一步的临床研究。更多细胞治疗辅料应用IND案例了解以及相关安全性数据等支持请联系上海曼博生物。

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上海曼博生物医药科技有限公司系BioLife Solutions中国区官方授权一级代理商，为国内客户提供包括Biolife明星产品CS10 (210102)等无血清、无蛋白成分原装品牌直接进口的多种系列冻存液产品，如有相关产品技术和销售咨询请联系上海曼博生物。

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