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Q-BLOCK 1min无蛋白封闭缓冲液——快速搞定Western Blot的封闭过程
发布时间:2022/07/06

你们还整天呆在实验室苦逼的做Western Blot吗?有没有因为封闭不完全导致条带背景不能满足实验要求而捶胸痛哭,或者苦于封闭时间过久而耽误自己“美好”的科研人生。今天就让我们来谈一谈WB中封闭过程,在此之前,先让我们回顾一下Western Blot过程:

蛋白免疫印迹(Western Blot)是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。WB可用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析,该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术,具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。

一、WB的封闭过程

当我们辛辛苦苦做完的免疫印迹实验,结果却出现背景过高,信号又太弱的现象,这就很有可能是你的封闭过程没有处理好的原因。在这里就让我们先来了解一下封闭过程,我们在做western blot实验时,会用到固相载体(如NC膜,PVDF膜),在这些固相载体表面有很多孔洞,通过上游的电转过程,凝胶上的蛋白被转移到固相载体上,蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。也就是说蛋白被塞进了表面的孔洞里面,但由于蛋白并不是连续的,它们会存在许多空隙,并且我们用的抗体本质也是蛋白,也会被吸附在孔洞之中,这样就会有许多非特异性吸附,从而干扰正常结果的呈现。


而常见的封闭过程就是利用封闭液中的蛋白让其与固相载体表面的空白位置结合,同样以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上,从而将结合位点填补和覆盖,避免后期一抗的非特异性结合,我们将这个过程称之为 “封闭”。同样,这两种作用使封闭液中的蛋白能够牢固的结合在空白位置上,这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上,而只会跟特异性蛋白结合。从而使结果呈现的更具有说服力,表达意义也更明显。


总的来说,封闭过程是为了避免高背景和非特异性条带的发生,这么一说,大家对封闭过程有了一个大致的了解了吧,是不是觉得很简单,虽然简单但并不意味着封闭就不重要,恰恰相反,他是整个WB承上启下的一环,也是你整个实验成功的关键。


二、常用的封闭液

从上述我们可以看出,封闭过程是Western Blot 至关重要的一部分, 所以正确的封闭液选择可以让抗体更好更准确的和抗原结合,为成功的WB奠定基础。虽然这个步骤操作简单,但是封闭液的选择却是令很多科研人头疼的问题。接下来我带大家了解一下用于WB实验常用的一些封闭液。


1、脱脂奶粉

脱脂奶粉属于最经济的封闭缓冲液了,需要时甚至可以直接从超市购买,通常使用浓度为 2.5-5% (w/v)。但由于脱脂奶粉是许多种蛋白质的混合物,里面可能存在生物素和碱性磷酸酶,一定程度上可能会导致背景污染,因此不适合生物素—亲和素的检测方法。此外,其中含有一定量的酪蛋白(casein),是一种磷蛋白(phosphoprotein),如果你的目标蛋白是磷蛋白的话,封闭过程不要选择脱脂奶粉作为封闭液,否则会有很多背景信号(background signal)。即使你的目标蛋白不是磷蛋白,因为是蛋白质的混合物,所以也容易产生较高的背景信号。


2、牛血清白蛋白(BSA)

牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,简称BSA)是从牛血清中提纯之后的一种球蛋白,也是实验室除了脱脂奶粉之外最常用的封闭缓冲液。BSA不是磷蛋白而且是单一蛋白,不会出现封闭磷酸化蛋白时出现背景过高的现象,但是提纯过程中有可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物,这些蛋白都可以和哺乳动物抗体产生交叉反应,从而增加非特异性背景信号 (non-specific background noise)。


3、血清

血清是许多蛋白质的混合物,同样可以被用来当做封闭剂。首先,血清能像BSA一样封闭一些非特异性的蛋白结合。此外,待检样本中可能会有Fc受体,可以和抗体恒定区(Fc)结合,与抗体特异性无关,因为封闭血清中有抗体,因此可以封闭掉实验用一抗及二抗和样本中Fc受体之间结合,进一步降低非特异性结合。通常使用的浓度为 5-10%(w/v)。但像BSA一样,它含有免疫球蛋白和血清蛋白,会和哺乳动物抗体产生交叉反应。


三、Q-BLOCK 一分钟无蛋白封闭缓冲液

通过对不同种类封闭液的一个学习,你是不是对封闭过程有了一个新的理解。但又开始迷茫自己今后的实验该选择什么样的封闭液?确实,如果选择了不适用的封闭液,可能会导致自己辛辛苦苦做的实验结果变得惨不忍睹,不要担心,在这里给大家推荐一款全能性的无蛋白封闭缓冲液,它能够满足你绝大多数封闭需求。“泉品”Q-BLOCK 一分钟无蛋白封闭缓冲液,它是一种高效快速的封闭缓冲液。多用于Western Blot封闭阶段,此外实验条件允许的情况下还可用于Wetern Blot过程中抗体(一抗、二抗)的配置。纯化学配方且不含蛋白质,能有效防止蛋白质交叉反应,短时间内能够有效提高被检测信号的信噪比。

1、快速高效

传统的WB实验封闭过程,常采用BSA(牛血清白蛋白)、5%的脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液,这些封闭液使用时为了充分封闭住固相载体上的抗原位点,一般需要室温孵育1-2h或者4度封闭过夜,延缓了实验进度,并且封闭时间过长会加大实验风险,导致结果的不稳定性。Q-BLOCK一分钟无蛋白封闭缓冲液针对这一点,将封闭时间缩短至一分钟,极大的加快了整个WesternBlot过程,另外,本产品无需稀释,即取即用,极大的节省了操作流程。


2、无蛋白质干扰

采用无蛋白配方,避免抗体与封闭剂的非特异结合,有效降低了背景。同时,本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素,对磷酸化特异抗体及生物素的检测也不会产生干扰。


3、性能高

本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合,因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,大大提高了抗体检测灵敏度。提供比传统封闭缓冲液更好的特定信号和更少的背景噪声,有效提高信噪比。


4、节省抗体

此类封闭液可应用于WB后续实验中抗体的配置,并且Q-BLOCK是无蛋白配方,用于抗体配置可有效延长抗体保存时间。能够节省抗体用量,性价比更高。


四、实验说明

1、从图中可知,与其他品牌相比,Q-BLOCK不仅操作时间短,更有效提高信噪比。

2、纯化学配方、不含蛋白质,稀释抗体可延长保存时间,抗体重复使用次数增加,极大的提高了抗体利用率:

这款封闭液是我们“泉品”现在主推的一款产品,品质上肯定对得起你的选择,使用过程中若遇到相关技术问题可随时与我们联系,我们一定竭尽全力为你的实验保驾护航,使用过程没有烦恼。


五、关于泉品

“泉品” 拥有专业化的资深团队,负责产品的研发,生产,质控,以及品牌推广。“泉品”的理念是“有泉·有品”,泉本意指水源,水是万物之源,寓意滋养,创新,朝气蓬勃,充满希望。品,本意为众多,如《易经》里“云行雨施,品物流形”,现本意又为品质。“泉品”以创新和高品质为核心价值理念,通过自身研发团队,以及与国内外专业科研团队强强联合,不断创新,为生命科学和医药研发行业提供高品质产品和服务。


为了追求给客户带来更好的服务和体验,针对生物医药企业和科研用户,我们将秉承“服务至上”的理念,为用户提供“泉品”的样品试用、技术支持、订单执行及配送服务。泉品现有产品包括:澳洲胎牛血清、一分钟无蛋白封闭缓冲液、自动化蛋白免疫杂交印迹仪(western Blot专用)、高性价比移液吸头、不同规格离心管、血清移液管、实验室移动热转印标签打印机、涂布棒、细胞过滤筛、试剂槽、接种环等,其他新增产品敬请期待。