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LentiBOOST慢病毒转导增强剂使用方法protocol

发布时间：2025/11/14 点击数：150

使用Lentiboost慢病毒转导增强剂建议转导步骤

参考表格的细胞密度进行种板（注意：如果细胞维持在某种选择压力下，种板时需要去除用于筛选的抗生素，直至维持到第3天）

使用lentiboost可参考表格的细胞密度进行种板

总原则：对于第一次实验，建议使用2-30之间的MOIs进行病毒转导（如下实验步骤以MOI 10举例），并将LentiBOOST-P以1：100的标准浓度添加到总体积（培养基+病毒）。

在第二次实验中，建议在1:20-1:1000范围内滴定LentiBOOST-P用量，以确定最小活性浓度。（各组分用量仅供参考，实际最佳转导条件以实验室优化结果为准）

4°C复苏慢病毒
在细胞中直接加入计算好的LentiBOOST-P体积量，轻轻混匀
按下表计算所需慢病毒颗粒用量，并加入细胞培养基中，轻轻混匀
Spinoculate（可选）：室温800g离心培养板90分钟（注意: Spinoculation步骤被发现可对大多数细胞增加转导效率。必须使用细胞培养板进行离心，以减少剪切力）
正常培养条件过夜培养细胞

移除含有病毒颗粒的培养基上清，更换成合适体积的正常培养基。

如果细胞汇合度较高，可在第四天稀释分板培养，后续按照常规流程进行培养基更换和细胞传代。

利用LV载体上的抗性筛选标记可筛选出稳定细胞系，事先需要进行杀伤曲线滴定合适的抗生素筛选浓度。（备注: 转导过程中请做好非转导阴性对照）

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