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LentiBOOST慢病毒转导增强剂使用方法protocol
发布时间：2026/02/03 点击数：370 Part1. CD34⁺ HSC细胞慢病毒转导实验方案（建议转导方案）
Day1：细胞接种
根据标准方案培养CD34⁺HSC。细胞在37°C的含5%二氧化碳的加湿培养箱中孵育。
Day2：慢病毒转导
计数CD34⁺HSC，并在24孔板中每孔接种1x10⁶个细胞。LentiBOOST增强剂和慢病毒直接添加到细胞中。
预实验建议：慢病毒转导的感染复数（MOI）可设置为2～30；LentiBOOST增强剂的初始工作浓度建议为1mg/mL，按体系总体积（培养基+病毒液）的1:100比例添加。
后续优化实验建议：需将LentiBOOST增强剂的浓度梯度设置为0.1～5mg/mL（对应体积比1:1000～1:20），以此筛选出该试剂的最低有效浓度。
此外，可根据需求选择离心辅助转导：室温条件下，600×g离心90分钟即可。
Day3：更换培养基维持培养
移除含有病毒颗粒的培养基上清，更换成合适体积的正常培养基维持培养。
Part2. T细胞转导实验方案（建议转导方案）
~Day0：T细胞接种及激活
根据标准方案刺激原代T细胞。此步骤应根据个人协议进行调整。
Day1：病毒转导
在+4°C下解冻慢病毒。
配制500μl细胞培养液，按体系总体积1:100的比例加入LentiBOOST增强剂，使其初始工作浓度达到1mg/mL。
后续可测试LentiBOOST增强剂的浓度范围，建议设置为0.1～5mg/mL。
按实验所需感染复数（MOI）向培养液中加入病毒载体，轻柔混匀。
预实验阶段，推荐将MOI值设置在2～30区间。
离心收集1×10⁶个细胞（细胞数量可根据实验需求调整）。
将细胞沉淀重悬于上述含LentiBOOST与病毒载体的培养液中，充分混匀。
将细胞悬液接种至24孔细胞培养板中。
离心转导（可选步骤）：将细胞培养板置于室温条件下，以800×g离心力离心90分钟。
将培养板放入培养箱，于37℃、5%CO₂条件下过夜培养。
Day2：更换培养基维持培养
按标准实验方案更换培养基，并维持培养。
