传统的蛋白质表达纯化流程十分依赖人工操作,并且往往需要几周甚至更久。无细胞蛋白表达的兴起可将这一时间缩短至十几个小时,但是仍需要现进行表达载体的制备,体外扩增和高通量蛋白表达然后再进行筛选等多步操作。Nuclera将这些复杂的流程集合到eProtein Discovery系统。该系统使用基于数字微流控的智能卡盒、无细胞蛋白质合成和荧光蛋白检测技术,使研究人员更容易大规模获取高质量蛋白质。
只要将目标蛋白质的序列输入配套软件,就可以利用预设融合标签定制DNA构建体以优化表达,然后将表达载体装载到机器上,该系统就会通过自动化构建筛选(可同时筛24种构建体 x 8种无细胞混合物=192种表达条件),在48小时内,根据可溶性、可纯化性和纯化产量数据确定最.佳表达条件,然后放大规模并获取蛋白质以供下游应用。该工作流程仅需3步,可生产18kDa~300kDa的蛋白质,还更容易地筛选和获取同源物、直系同源物、突变和异构体。
1. 设计与准备:将蛋白质序列输入软件,利用预设融合标签设计构建体,并使用eGene制备试剂盒制备表达构建体。
2. 表达与纯化:自动化筛选192种表达条件以评估可溶性产量,再从其中选取30种进行strep-tag可纯化性评估,依据筛选数据确定最.优eGene /无细胞混合组合,整个过程快速效率高,为后续研究奠定基础。
3. 放大与应用:基于筛选结果对蛋白质进行微克至毫克级别的放大生产,最终获得高纯度蛋白质,满足不同实验需求。
• 未知的药物靶点
• 难以表达的蛋白质
• AI/ML蛋白质工程
• 从头设计蛋白质
• 可开发性评估
• 氨基酸标记