原代细胞培养五大原则

掌握影响细胞复苏与培养状态的关键操作，了解细胞运输与储存、快速复苏、DMSO处理、消化传代以及培养器皿选择等基本原则。（可点击下方“下载资料”查看更多信息）

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产品信息

开始前，请确保所有必需的试剂和耗材均已准备就绪。实验中有几个步骤需要立即按顺序操作；在细胞安全接种并放入培养箱之前，必须全神贯注。

1. 正确的运输和储存

为确保细胞最大程度的存活率，冷冻管在运输过程中必须用干冰覆盖，并在收到后正确储存。

从Cell Applications到最终用户的总运输时间不应超过3-4天。分销商必须在收到包裹后立即补充干冰并运送给最终用户。

如果冷冻管未立即使用，请将其储存在液氮气相中。切勿长期储存在-80°C或干冰中。

从液氮中取出冷冻管时，应立即将其埋入干冰中，并尽快启动解冻程序。

解冻时间：在 37°C 水浴中解冻冷冻管，时间不超过 90 秒。

黄金法则：当水浴中仍有可见的冰晶时，将小瓶取出。

接种贴壁细胞：轻轻吸取混合，然后迅速将细胞悬液转移到推荐的培养瓶中，该培养瓶中含有适量的预热培养基（例如，T-75 培养瓶中含有 15 mL 培养基）。

接种悬浮细胞：轻轻混匀细胞悬液，并立即用预热的培养基将其稀释至少 1:10。以 400xg 离心 5 分钟，移除并弃去上清液，将细胞接种于培养基中。

！重要提示：DMSO虽然能在冷冻过程中保护细胞，但在解冻后却对细胞具有极强的毒性。

在室温或37°C下长时间暴露于DMSO会明显降低细胞活力和恢复能力。

除非实验方案另有明确规定，否则请勿离心刚解冻的贴壁细胞。*刚解冻的原代细胞极其脆弱，对机械应力高度敏感。

将解冻的贴壁细胞接种到装有预热培养基的培养瓶中过夜，然后更换培养基以去除DMSO。

试剂温度：请使用推荐浓度的胰蛋白酶/EDTA溶液。切勿将胰蛋白酶/EDTA溶液加热至37°C；请在室温下使用。

监测：在胰蛋白酶消化过程中，用显微镜密切观察细胞。一旦细胞变圆，就轻敲培养瓶侧壁使其脱落。

防止损伤：不要等待细胞自行脱落。长时间暴露于胰蛋白酶会损伤细胞膜，并大幅降低细胞活力。

仅使用专为贴壁细胞培养应用而设计的组织培养处理（TC处理）培养瓶和培养皿。