本指南将基于Solallis制造的Stem Design系列化学成分限定MSC无血清培养基（CDM）产品的基本特征及使用方法，向各位科学家分享化学成分限定MSC培养基在使用时的常见问题。

温馨提醒：当本文描述与其他品牌的产品不一致的情况时，请联系产品制造商以取得与该品牌产品特性更加匹配的专业性指导意见。

常见基本问题及解答

1、Stem Design系列培养基怎么只有1瓶？为什么不是A、B瓶？

Stem Design系列培养基为ready-to-use的即用型完全培养基，无需额外添加补充剂，即无需B瓶。

2、收到Stem Design的CDM系列培养基时该如何保存？

请收到Stem Design CDM系列时遵循产品标签或说明书的储存条件进行保存，即请-20℃冰箱中保存。

3、Stem Design系列等CDM如何解冻？

推荐在2~8℃条件下解冻Stem Design系列等CDM培养基。

4、Stem Design系列等CDM解冻后如何保存？可以稳定保存多久？

CDM解冻后通常保存在2~8 ℃。以Stem Design的CDM为例，解冻后可在2~8℃稳定储存4周；如使用其他品牌请联系制造商进行确认。

5、Stem Design系列等CDM在使用时需要添加青霉素-链霉素（Penicillin-Streptomycin，PS）溶液吗？

不推荐在使用Stem Design系列CDM时添加青霉素-链霉素溶液。理由如下：

（1）掩盖污染风险CDM不含未知成分，添加抗生素可能掩盖低水平微生物污染，导致后续大规模培养失败。

（2）违背“化学成分限定”初衷PS由青霉菌、灰色链霉菌等霉菌生产纯化，存在引入不明杂质的风险，与CDM的培养体系部匹配。

（3）细胞毒性影响PS具有影响细胞代谢和细胞功能的潜在风险。

6、使用Stem Design系列等CDM时，对细胞接种密度是否有明确要求？

以Stem Design为例：推荐以 1000-5000 cells/cm2密度接种细胞。若第三天收获细胞并进行传代时的推荐接种密度为3000 cells/cm2；若第五天收获细胞并进行传代时的推荐接种密度为1500 cells/cm2。

7、使用Stem Design系列等CDM时，建议多少天更换一次培养基？

通常Stem Design MSC扩增培养基的换液频率为3~5天。

8、使用Stem Design系列等CDM时，推荐使用哪些细胞培养板/瓶？

推荐使用Sumitomo Bakelite flasks, Corning CellBIND flasks，以保障MSC细胞的良好贴壁性能。

9、若某些批次或donor的细胞贴壁性较弱，有哪些方法可以改善其贴壁性？

推荐使用Biolamina人层粘连蛋白LN521（点击查看）对培养板进行预coating，以改善其贴壁性。

以上内容简要介绍了Stem Design系列等CDM在使用时的一些常见问题，接下来将为各位科学家介绍在细胞传代消化时容易忽略的步骤及注意事项。

细胞消化传代注意事项总结

1、由于CDM完全培养基中不包含对胰蛋白酶、胶原酶等消化酶或非酶消化液发挥终止消化作用的活性成分（如血清、酶抑制剂等），因此CDM不具有终止消化的作用。

2、如何选择的适配的消化试剂？

以CDM培养MSC为例：

① 胰蛋白酶类消化试剂：请选择以重组胰蛋白酶为主要活性成分的消化试剂，如需GMP等级产品，请选择符合GMP标准的产品；

② 胶原酶类消化试剂：请选择以重组胶原酶为主要活性成分的消化试剂，如需GMP等级产品，请选择符合GMP标准的产品，如Nordmark Collagenase NB6 GMP、Collagenase NB1 GMP（点击查看）；

③ 其他：混合酶消化液、非酶消化试剂等。

3、如何终止消化？

① 胰蛋白酶终止消化

a）使用胰蛋白酶抑制剂终止消化（终止效果不可逆），如大豆胰蛋白酶抑制剂（STI）、α1-抗胰蛋白酶等；

b）使用专用无血清终止试剂终止消化，请优先选择重组产品或化成合成产品；

c）冷却稀释法：通过添加适量体积的预冷PBS或其他缓冲溶液，降低体系温度以降低胰蛋白酶活性（终止效果可逆）。

② 胶原酶终止消化

a）酶抑制剂终止法使用胶原酶抑制剂终止消化，如EDTA等金属离子螯合剂、半胱氨酸、GM6001 MMP抑制剂等特异性小分子抑制剂、TIMP-1, TIMP-2等金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）；

⚠️半胱氨酸及衍生物为胶原酶的强效抑制剂，可破坏胶原酶的二硫键结构，使胶原酶发生不可逆失活。半胱氨酸本身可能对某些敏感细胞有毒性，且需要通过后续离心和洗涤步骤将其彻底移除。

⚠️EDTA等螯合剂对胶原酶的抑制作用是可逆的，且残留的EDTA等螯合剂会螯合细胞膜表面的Ca²⁺，影响贴壁细胞完整性，因此需要将EDTA、酶等的残留清洗干净。

b）冷却稀释法：通过添加适量体积的预冷PBS或其他缓冲溶液，降低体系温度以降低胶原酶酶活性。

③ 复合酶终止消化

请根据复合酶的活性成分选择适配的酶抑制剂进行终止消化，或采用冷却稀释法进行终止消化。

4、是否有必要清洗掉残留的消化酶、消化终止试剂？

建议对CDM培养体系中扩增的细胞在消化传代后将消化试剂、消化终止试剂清洗干净（无菌PBS等缓冲液洗涤3次即可）。理由如下：

① CDM中不包含抑制消化酶的成分，残留的消化酶在37℃条件下将持续发挥作用，对细胞扩增发挥负作用；

② 残留的消化酶（部分类型酶）会对细胞造成形态损伤、生长抑制、功能异常等负面影响；

③ 残留的消化酶（部分类型酶）具有水解细胞表面黏附蛋白（如钙黏蛋白、整合素）的功能，酶的残留将会降低细胞的粘附性能；

④ 部分终止消化试剂对细胞本身具有毒副作用。

本文仅展示了部分已知问题及解决方案，如您在使用CDM时遇到其他困惑也欢迎联系曼博生物进行交流。

免费试用申请