一、癌症组织保存

获取原代组织对许多研究领域非常重要，特别是随着医疗保健逐步向个性化医学发展，原代组织在advanced筛选技术、诊断、药物开发和患者模型生成中的应用变得愈加重要。然而，组织一旦采集，其质量会迅速下降，因此需要尽可能在采集后尽早使用，以保证获得较佳的质量结果。遗憾的是，组织采集地点往往离实际需要这些组织的地方较远，这就导致了长时间的运输过程，从而影响了组织的质量。而Atelerix TissueReady Plus系列能为此类生物样本类型及应用场景提供一个灵活的常温运输解决方案，延长生物样本的可用时间至4-5天，增加处理流程的灵活性。以下是一些样本保存案例和数据展示。

1、使用TissueReady PLUS存储时，肿瘤组织能够保持其组织学结构和标记物表达。

癌症组织从患者体内获取后，经过临床病理实验室处理，并在TissueReady PLUS中室温存储2天，再进行后续处理。然后，临床病理学家对切片进行检查和存储，并且在评估过程中不知晓组织的存储情况。结果显示，与未存储的组织和仅存储在培养基中的组织相比，使用TissueReady PLUS存储2天后的癌症组织保持了良好的组织学完整性，AE1/AE3和Ki67标记物依然存在，同时RNA也能够成功提取。

使用TissueReady PLUS在室温下存储2天的癌症组织能够保持其组织学结构和病理学标记物

图1. 使用TissueReady PLUS在室温下存储2天的癌症组织能够保持其组织学结构和病理学标记物。肝脏、肾脏和食管的癌症组织从患者体内获取后送到临床病理实验室，进行即时处理（不存储）或存储在TissueReady PLUS或DMEM培养基中。样本在室温下存储2天后进行后续处理。处理过程包括：样本进行固定、石蜡包埋和切片，然后用H&E染色，并进行了免疫组织化学标记，使用了AE1/AE3（角蛋白混合物）和Ki67（增殖标记）。接着，临床病理学家对H&E染色切片进行了评估，并给出了组织学完整性评分。评分使用10分制：10分表示完美，9到5分表示质量良好或可评估，4到0分表示质量差（不可用）。不同形状的点表示不同来源的组织：方形代表肝脏，圆形代表肾脏，三角形代表食管。

2、储存在TissueReady PLUS中的组织适用于分子生物学评估

TissueReady PLUS保存的组织可以提取RNA和进行原位杂交

图2. TissueReady PLUS保存的组织可以提取RNA和进行原位杂交。癌症组织从患者体内取出，并送到临床病理实验室进行处理：立即处理（不存储）、存储在TissueReady PLUS或DMEM培养基中。样本在室温下分别保存2天和5天后再进行后续处理和检测。具体操作包括：a) 用RNA提取试剂盒从组织中分离RNA，并通过纳米滴定分光光度计测量RNA的量。不同的点形状代表不同来源的组织，方形表示肝脏，圆形表示肾脏，三角形表示食管。b) 对保存的组织进行HER2基因和17号染色体的双重DNA原位杂交（DDISH），目的是探查食管组织中的癌症情况。

3、使用TissueReady PLUS保存组织时间可长达5天，后续用于分离、培养和多次传代扩增

为了评估癌症组织中的细胞分离情况，研究人员从食管癌切除的组织中分离细胞，通过组织解离法提取细胞，并在存储4-5天后用TissueReady PLUS保存。然后，研究人员在室温下扩展细胞并对癌症标记物进行染色，并与新鲜、未保存的癌症组织中的细胞进行比较。结果显示，用TissueReady PLUS保存的组织中的细胞在细胞活力、细胞数量、癌细胞（角蛋白-7阳性）与正常细胞（角蛋白-7阴性）的比例、以及继续扩增和传代（传代6次，冷冻并复苏）等方面，与新鲜未保存的组织中的细胞相当（见图3）。

从新鲜癌症组织和通过TissueReady PLUS保存的癌症组织中分离的细胞在细胞活力和数量上相当

图3.从新鲜癌症组织和通过TissueReady PLUS保存的癌症组织中分离的细胞在细胞活力和数量上相当。癌症组织从患者身上取出后，会送到临床病理实验室，在那里它们要么被保存在TissueReady PLUS里，要么放在培养基中，然后再送到肿瘤研究中心。组织在室温下保存4到5天后，再通过解离处理分离出细胞。分离出来的细胞经过固定和染色后，会使用角蛋白-7来标记癌细胞和非癌细胞。具体操作包括：a) 固定后的细胞用显微镜观察，角蛋白-7染色显示阳性细胞（棕色）和阴性细胞（蓝色），从而计算癌细胞的比例。b) 使用显微镜和台盼蓝排斥法来测定细胞的活力。c) 通过显微镜和台盼蓝排斥法来计数活细胞，并计算可存活细胞的数量。细胞通过免疫组化方法进行角蛋白-7染色，使用Vectastain ABC和DAB底物试剂盒进行可视化。通过计算阳性和阴性染色细胞的比例，得出可存活细胞的数量。

二、小鼠健康组织低温保存

人类和动物的原代组织在许多研究领域、药物开发以及临床诊断中起着重要的作用。虽然福尔马林固定和冷冻包埋的组织常用于组织学和某些分子分析，但它们不适用于一些更为敏感的分析或功能研究，例如心肌收缩性研究和通过皮肤吸收化学物质的研究。

使用TissueReady储存技术时，多种小鼠组织能够保持良好的组织学完整性。

如图4，小鼠心脏、肌肉、肾脏和肝脏在TissueReady中2-8°C保存7天后，释放出来并采用苏木精和伊红（H&E）染色法进行评估。H&E染色结果表明，组织的结构和完整性得到了有效保持。

在TissueReady中保存新鲜收集的小鼠组织

图4. 在TissueReady中保存新鲜收集的小鼠组织。新鲜的小鼠组织被分离、解剖并放置在TissueReady中。心脏、肌肉、肾脏和肝脏在冷藏温度（2-8°C）下保存了7天，然后去除凝胶。随后，组织被快速冷冻并切片，之后进行苏木精-伊红（H&E）染色。未保存的组织在取回后立即进行处理。

三、人皮肤组织低温保存

全层人类皮肤是药物和化妆品开发以及皮肤疾病研究中必需的功能性组织。因此，这类组织不能经过冷冻或固定处理，但其供应有限且通常需要长时间运输。

使用TissueReady储存技术时，人类皮肤组织能够保持良好的活力和组织学完整性

新鲜的人类腹部皮肤组织在室温下使用TissueReady保存5天。组织释放后，通过组织学染色评估其结构和完整性，同时通过代谢活性测试评估组织活力。H&E染色和胶原蛋白染色结果显示，释放后的组织结构得到有效保存，且相对代谢活性保持稳定（见图5）。

使用TissueReady保存新鲜收集的腹部皮肤活检样本

图5. 使用TissueReady保存新鲜收集的腹部皮肤活检样本。新鲜的皮肤活检样本被分离、解剖后放置在TissueReady中，于室温下保存5天。保存后去除凝胶，并将组织置于培养基中培养4小时。a：通过H&E染色（上图）和胶原蛋白染色（下图）检查组织的完整性。b：通过Alamar Blue评估相对代谢活性，来进一步评估组织的活力。未保存的组织在取回后立即进行处理。