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发布时间：2026/04/15 点击数：6 eProtein Discovery蛋白表达系统应用案例：破解转录因子制备难题（上篇）
摘要：eProtein Discovery依托无细胞蛋白表达筛选系统和数字微流控技术实现蛋白表达筛选自动化，为复杂难表达转录因子的制备提供新路径。
关键词：蛋白表达系统,无细胞蛋白表达筛选,eProtein Discovery,无细胞蛋白表达,无细胞蛋白合成,难表达蛋白快速制备,数字微流控蛋白筛选
一、转录因子研究的制备难点
转录因子是细胞通路的核心调控蛋白，参与细胞发育、分化等生理过程。其中，转录因子L（TFL）参与多项组织发育，其表达异常与部分发育障碍相关，是相关领域的重要研究靶点。
但TFL的制备存在诸多困难：该蛋白包含LIM结构域、同源结构域及内在无序区域，在大肠杆菌体系中表达易形成不溶性包涵体，复性难度大，功能性蛋白获取量少；在昆虫细胞、哺乳动物细胞、酵母等其他体系中，也存在获取量不足、纯化繁琐、蛋白易降解等问题，阻碍了TFL的结构解析、功能研究及靶向研究推进。
针对这一行业痛点，nuclera推出的eProtein Discovery无细胞蛋白表达筛选系统展现出独特优势。曼博生物代理eProtein Discovery，如有需要欢迎点击了解无细胞蛋白表达系统详情（https://www.mine-bio.com/nuclera/）！研究人员借助该系统，成功完成全长TF L及两个功能结构域的无细胞蛋白表达与纯化，通过优化蛋白可溶性功能筛选条件，验证了制备蛋白的DNA结合功能。这一实践不仅为这类复杂难表达蛋白研究提供了可参考的技术方案，也充分体现了无细胞蛋白合成技术的应用价值，下面将详细解析该系统的核心技术与工作流程。
二、eProtein Discovery系统的核心技术与工作流程
eProtein Discovery是nuclera推出的无细胞蛋白合成系统，又称体外转录/翻译系统，其核心优势在于摆脱对活体细胞培养的依赖，实现蛋白制备的自动化。该系统依托cell-free system，结合数字微流控蛋白筛选、纳升液滴蛋白表达等关键技术，实现无细胞蛋白表达自动化，为难表达蛋白快速获取提供技术保障。
具体而言，该系统可同时筛选24种可溶性蛋白或11种膜蛋白，每种蛋白搭配8组不同表达条件，48小时内即可完成从DNA到活性蛋白的制备与纯化，其筛选结果还能为体内表达体系的菌株选择、质粒设计提供参考，顺畅衔接后续蛋白纯化表达流程。其核心工作流程分为三个关键阶段，全程自动化操作，可有效缩短蛋白制备周期，具体如下：
筛选条件优化：将设计好的eGene构建体、定制化无细胞混合体系加载至数字微流控卡盒，系统24小时内可完成192组表达条件筛选，生成192组表达数据和30组纯化数据，自动分析并筛选出适配的表达组合，确定蛋白放大生产的适配条件；
蛋白放大制备：根据筛选结果，选取对应表达组合进行过夜放大培养，借助专用纯化试剂完成蛋白纯化，从而获得微克级目标蛋白，可通过SDS-PAGE、Western blot等实验验证蛋白表达与纯化效果；
蛋白功能验证：将制备好的蛋白用于后续功能实验，验证其生物学功能，完成从蛋白制备到功能研究的闭环，为后续科研提供直接支撑。
以上就是eProtein Discovery无细胞蛋白表达筛选系统的核心技术原理与工作流程，明确了该系统实现难表达蛋白快速制备的具体路径。在下篇内容中，我们将结合具体实验案例，详细阐述该系统在TF L制备、验证中的实际应用，以及其在多个科研领域的应用价值。
本文基于无细胞蛋白表达、无细胞蛋白合成等应用公开资料由中国解决方案提供商上海曼博生物整理，仅用于科研信息分享。上海曼博生物可提供eProtein Discovery蛋白表达系统、无细胞蛋白表达筛选系统及难表达蛋白快速制备相关产品与技术支持。
