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Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂

Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂

  • 品牌:MineBio

  • 品名:Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂

  • 货号:HM-01

  • 规格:0.05g/瓶

  • 目录价:询价

Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂
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产品定位

Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂

产品定位:

Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂是一种化学成分限定的杂交瘤细胞培养补充剂,专为杂交瘤细胞培养而设计。它富含经成分和浓度明确的成分,无动物来源成分,无血清,无蛋白,可与 DMEM、RPMI-1640 等基础培养基及 HAT 筛选体系配合使用,适用于 NS-1、SP2/0 等常用小鼠骨髓瘤融合体系。Hybriboost 能提升杂交瘤细胞的克隆效率和存活率,确保培养过程安全稳定。


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Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂

Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂(货号 HM-01,0.05 g/瓶)

产品核心特点

成分限定:配方成分与浓度明确,不含动物来源成分、无血清、无蛋白。
作用环节:针对两次筛选与单克隆化阶段的低存活问题设计。
兼容性:可与 DMEM、RPMI-1640 等基础培养基及常用抗生素配合使用(建议以小规模验证为准)。
适用体系:覆盖 NS-1、SP2/0 等常用小鼠骨髓瘤融合体系。
使用阶段:筛选期、单克隆化、稳定株日常培养三个阶段均可添加。
规格与保存:0.05 g/瓶,可配制 1 L 培养基;未开封 2–8℃ 避光,有效期 24 个月。

使用方法与建议添加时间

建议添加时间

1      HAT 筛选阶段      添加至 HAT 培养基中,用于融合后的选择培养;可梯度稀释 2–4 倍使用。
2      单克隆化阶段      用于有限稀释法或单细胞分选后的低密度培养,维持单细胞克隆生长。
3      稳定株日常培养      可作为常规添加剂用于已建立的杂交瘤细胞培养,支持梯度稀释使用。

配制方法(0.05 g/瓶,可配制 1 L 培养基)

① 溶解用 1 mL 双蒸水溶解 0.05 g 粉末。
② 混合与 1 L 常规细胞培养基混合均匀。
③ 除菌经 0.22 μm 滤器过滤除菌后使用。

亦可先用 5 mL 双蒸水溶解粉末,与 1 L 培养基混合均匀后一并过滤除菌。两种配制路径均可适配含 10% FCS 及抗生素的基础培养基;具体添加浓度与稀释倍数建议结合自身细胞株与培养体系做小规模验证后确定。

产品验证数据

1. 使用Hybriboost有助于提高杂交瘤的融合克隆效率

将新形成的 PEG 融合杂交瘤细胞接种于 96 孔板,并设置三种培养条件作对比:含有 Hybriboost 的 FCS 培养基、含有饲养层的 FCS 培养基,以及常规 FCS 培养基。融合后第 14 天统计各孔内存活杂交瘤集落数。

验证基础:四次独立的融合实验,使用新鲜制备的小鼠脾脏,对 NS-1 和 SP2/0 这两种小鼠骨髓瘤融合伴侣进行了评估。

Hybriboost 提高杂交瘤融合克隆效率

图 1 三组条件下每 96 孔板的集落数(NS-1 与 SP2/0 各四次独立融合实验)

2. 使用Hybriboost有助于提高杂交瘤细胞单株化成功率

在显微镜下对孔内存活杂交瘤集落的数量进行目视计数。

对比数据:在验证实验中,Hybriboost 方案的杂交瘤单株化(单克隆化)成功率接近 100%,高于常规 FCS 培养基组的 10%–40% 和饲养层培养基组的 50%–80%。

Hybriboost 提高杂交瘤细胞单株化成功率

图 2 三组条件下出现集落的孔数(每 96 孔板)

3. Hybriboost化学成分限定,不影响抗体生产产量与质量

选取杂交瘤细胞克隆(抗人转铁蛋白,L3B5),在三种培养基(含 Hybriboost 的 FCS 培养基、含饲养层的 FCS 培养基、常规 FCS 培养基)中培养七天,随后收获上清液,通过 ELISA 测定分泌性抗体的水平。

结果:培养 7 天后三组上清液的检测信号处于同一水平,在验证实验中未观察到对抗体分泌的明显影响。

Hybriboost 不影响抗体生产

图 3 三组条件下培养上清的 ELISA 检测信号(A410 nm,培养第 1–7 天)

以上数据来自产品制造商的验证实验,供参考。实际表现可能因细胞株、培养基配方与操作条件不同而存在差异。

产品规格

项目内容
产品Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂
货号HM-01
规格0.05 g/瓶,适用于配制 1 L 培养基
有效期24 个月
保存(未开封)2–8℃ 避光保存
保存(配制于双蒸水)−20℃ 保存不超过 3 个月
保存(配制于培养基)2–8℃ 保存不超过 2 周

本产品仅供科研使用。

杂交瘤技术背景

杂交瘤技术是单克隆抗体制备的经典路径,其核心在于获得稳定分泌特异性抗体的纯细胞株。杂交瘤细胞的特点、筛选方法与原理以及两次筛选流程,是决定实验成败的关键环节。

1. 杂交瘤细胞的特点

杂交瘤细胞是由 B 细胞与 HGPRT 缺陷型骨髓瘤细胞融合而来的杂交细胞,兼具两种亲本细胞的关键生物学特性:

杂交瘤技术原理示意图

图 4 杂交瘤技术流程示意(免疫 → 融合 → 杂交瘤 → 单克隆抗体)

  • 免疫 B 淋巴细胞功能:能够合成并分泌针对特定抗原的特异性抗体。
  • 骨髓瘤细胞特性:具有体外无限增殖能力,可实现抗体的规模化、标准化生产。
  • 固有缺陷:新融合的杂交瘤细胞稳定性差,对培养环境高度敏感,在筛选和单克隆化阶段存活率低,是导致实验失败与阳性克隆丢失的重要原因。

2. 杂交瘤细胞的筛选方法和原理

细胞融合后会产生三种细胞:未融合的 B 淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、成功融合的杂交瘤细胞。筛选的核心原理是利用不同细胞的代谢缺陷差异,通过选择性培养基去除非目标细胞。

目前通用的标准方法为 HAT 选择性培养基筛选法。HAT 由次黄嘌呤(hypoxanthine,H)、氨基蝶呤(aminopterin,A)与胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidine,T)三种成分组成。氨基蝶呤通过抑制二氢叶酸还原酶(DHFR)阻断核苷酸的从头合成途径;骨髓瘤细胞因缺乏 HGPRT 酶,无法利用嘌呤的补救合成途径,因无法合成 DNA 而死亡;未融合的 B 淋巴细胞虽有 HGPRT 酶,但在体外无法长期培养,会在 7–10 天内自然凋亡;只有成功融合的杂交瘤细胞同时具备 HGPRT 和无限增殖能力,能在 HAT 培养基中存活并增殖。

3. 杂交瘤细胞两次筛选的方法

  • 第一次筛选(选择性存活筛选):即 HAT 培养基筛选,目的是从融合后的混合细胞群中去除未融合的亲本细胞,保留存活的杂交瘤细胞。
  • 第二次筛选(抗体特异性筛选):对存活的杂交瘤细胞,采用 ELISA、Western Blot、免疫荧光等方法检测培养上清中的目标特异性抗体,筛选阳性克隆。
  • 单克隆化:第二次筛选后需进行单克隆化培养(有限稀释法或单细胞分选法),确保最终细胞株来源于单个细胞。此阶段单细胞增殖能力弱,是实验失败的另一个高发环节。

相关研究

  1. Li CJ, Huang PH, Chen HW, et al. Development and characterization of mouse monoclonal antibodies targeting to distinct epitopes of Zika virus envelope protein for specific detection of Zika virus. Appl Microbiol Biotechnol. 2021.
  2. Lai GC, et al. Neutralization or enhancement of SARS-CoV-2 infection by a monoclonal antibody targeting a specific epitope in the spike receptor-binding domain. Antiviral Research. 2022;200:105290.
  3. Su SC, et al. Structure-guided antibody cocktail for prevention and treatment of COVID-19. PLoS Pathogens. 2021;17(10):e1009704.
  4. Lu RM, et al. Monoclonal antibodies against nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 variants for detection of COVID-19. Int J Mol Sci. 2021;22(22):12412.
  5. Ko SH, et al. Monoclonal antibodies against S2 subunit of spike protein exhibit broad reactivity toward SARS-CoV-2 variants. J Biomed Sci. 2022;29(1):108.

 

常见问题 FAQ

A 组 · 产品常见问题

Q1|Hybriboost 的主要作用是什么?适合哪些培养场景?

Hybriboost 是化学成分明确的杂交瘤细胞培养补充剂,用于支持杂交瘤细胞在低存活阶段的生长。适用于三个场景:① HAT 筛选阶段(添加至 HAT 培养基);② 单克隆化过程(维持单细胞克隆生长);③ 已建立杂交瘤细胞的日常培养(可梯度稀释 2–4 倍使用)。

Q2|使用后,目的阳性克隆的绝对数量一定会增加吗?

不一定直接增加。融合产物中包含阴性克隆,需经筛选和鉴定后才是阳性克隆。Hybriboost 的作用是提高细胞在筛选前的存活率,为阳性克隆筛选提供更充足的细胞基础。

Q3|与常规培养基、饲养层培养基相比,有哪些差异?

主要体现在三方面:① 克隆形成数——在 NS-1 融合体系中,验证实验观察到每 96 孔板可形成约 1000–1500 个集落(见数据 1);② 成分明确——化学成分限定,不含动物来源成分、无血清、无蛋白;③ 不依赖饲养层——可适配 DMEM、RPMI-1640 等多种基础培养基。

Q4|规格是多少?如何配制使用?

产品规格为 0.05g / 瓶,可配制 1L 培养基。提供两种便捷配制方法:方法一:①用 5mL 双蒸水溶解粉末;②与 1L 常规细胞培养基混合均匀;③经 0.22μm 滤器过滤除菌后使用。方法二:①用 1mL 双蒸水溶解粉末;②经 0.22μm 滤器过滤除菌;③将过滤后溶液与已经过滤的 1L 常规细胞培养基混合均匀即可。备注:可适配含 10% FCS 及抗生素的基础培养基,实际可按自身培养基体系调整。

Q5|保存条件是什么?有效期多久?

未开封 2–8℃ 避光保存,有效期 24 个月;配制于双蒸水后 −20℃ 保存不超过 3 个月;配制于培养基中 2–8℃ 保存不超过 2 周。建议按使用量分批配制或配制后分装,避免反复冻融。

Q6|可以和其他添加剂、培养基搭配使用吗?

可与 HAT 培养基、DMEM / RPMI-1640 等常规培养基及常用抗生素搭配使用。具体体系建议先做小规模验证。

Q7|Hybriboost 与同类竞品相比,优势在哪里?

相比同类竞品优势有三点:①价格更具竞争力,比同类产品优惠10%-20%不等,批量采购额外再享折扣;②成分更安全纯净:无动物源性成分、无血清、无蛋白,避免杂蛋白干扰和潜在生物安全风险,而部分竞品含动物来源成分或未明确成分;③使用更灵活:无需调整现有培养体系,单克隆化、日常培养等多场景通用,部分竞品仅适用于特定阶段(如融合或亚克隆)

Q8|使用中遇到技术问题,如何获取支持?

① 电话咨询:021-5176 9110;② 邮件咨询:sales@mine-bio.com;③ 官网咨询:点击页面「在线咨询」,客服将在线解答;非工作时间可在右侧「问题留言」窗口留言,我们将在 1–2 个工作日内回复,提供配制指导、使用场景适配与问题排查等支持。

B 组 · 杂交瘤技术常见问题

Q9|杂交瘤细胞的两次筛选分别指什么?Hybriboost 能发挥什么作用?

第一次为 HAT 选择性存活筛选,去除未融合的亲本细胞,此阶段添加 Hybriboost,用于支持细胞在筛选期的存活,减少集落数损失;第二次为抗体特异性筛选,通过 ELISA、Western Blot 等方法筛选阳性克隆,后续单克隆化阶段添加,用于支持低密度下单细胞的增殖与存活。

Q10|杂交瘤细胞的核心特点是什么?对培养和筛选有什么要求?

兼具 B 淋巴细胞分泌特异性抗体的能力与骨髓瘤细胞的无限增殖能力;但新融合的杂交瘤细胞稳定性差、对培养环境敏感,尤其在筛选和单克隆化阶段存活率低。

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