Hybriboost 促杂交瘤细胞生长剂

化学成分限定的杂交瘤细胞生长试剂

Hybriboost是一种专为杂交瘤细胞培养而设计的特殊补剂。它富含经成分和浓度明确的成分，无动物来源成分，无血清，能大幅提升杂交瘤细胞的克隆效率和存活率，确保培养过程安全稳定。

杂交瘤技术核心背景

杂交瘤技术是单克隆抗体制备的金标准技术，其成功的核心在于获得稳定分泌特异性抗体的纯杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞的特点、筛选方法与原理以及两次筛选流程是决定实验成败的关键环节，也是目前多数实验室面临的主要技术瓶颈。

1.杂交瘤细胞的特点

杂交瘤细胞是经聚乙二醇（PEG）或电融合等技术获得的融合细胞，杂交瘤细胞是哪两种细胞融合？杂交瘤细胞是B细胞与HGPRT缺陷型骨髓瘤细胞融合的产物，兼具两种亲本细胞的关键生物学特性：

•免疫B淋巴细胞功能：能够合成并分泌针对特定抗原的特异性抗体

•骨髓瘤细胞特性：具有体外无限增殖能力，可实现抗体的规模化、标准化生产

•固有缺陷：新融合的杂交瘤细胞稳定性差，对培养环境高度敏感，在筛选和单克隆化阶段细胞存活率极低，是导致实验失败、阳性克隆丢失的最主要原因

2. 杂交瘤细胞的筛选方法和原理

细胞融合后会产生三种细胞类型：未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、成功融合的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞筛选的核心原理是利用不同细胞的代谢缺陷差异，通过选择性培养基去除非目标细胞，仅保留杂交瘤细胞。

目前通用的标准筛选方法为HAT选择性培养基筛选法，HAT由次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸腺嘧啶（T）三种核心成分组成，氨基蝶呤（A）会阻断细胞DNA合成的主要途径，骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT酶，无法利用DNA合成的补救途径，会因无法合成DNA而死亡，未融合的B淋巴细胞虽有HGPRT酶，但在体外无法长期培养，会在7-10天内自然凋亡，只有成功融合的杂交瘤细胞，同时拥有HGPRT和骨髓瘤细胞的无限增殖能力，能在HAT培养基中存活并增殖

3. 杂交瘤细胞两次筛选的方法

为获得遗传背景单一、稳定分泌目标抗体的纯细胞株，必须经过两次关键筛选，缺一不可：

•第一次筛选（选择性存活筛选）：即上述HAT培养基筛选，目的是从融合后的混合细胞群中彻底去除未融合的亲本细胞，仅保留存活的杂交瘤细胞。

•第二次筛选（抗体特异性筛选）：对第一次筛选存活的杂交瘤细胞，采用ELISA、Western Blot、免疫荧光等方法，检测细胞培养上清中是否存在目标特异性抗体，筛选出真正能分泌目标抗体的阳性克隆。

•补充说明：第二次筛选后必须进行单克隆化培养（有限稀释法或单细胞分选法），确保最终细胞株来源于单个细胞，避免多克隆混杂。此阶段单细胞增殖能力极弱，是实验失败的另一高发环节。

Hybriboost促杂交瘤细胞生长剂正是针对上述筛选和单克隆化阶段的核心痛点设计，通过化学成分限定的优化配方，大幅提升杂交瘤细胞在两次筛选及单克隆化过程中的存活率和克隆效率。

Hybriboost产品特点：

 1. 使用Hybriboost有助于提高杂交瘤的融合克隆效率

我们将新形成的 PEG 融合杂交瘤细胞接种于 96孔板，并严格对比了以下三种培养条件：含有 Hybriboost的FCS 培养基、含有饲养层的FCS培养基，以及常规FCS培养基。细胞融合后第14 天，对所有杂交瘤细胞进行了HAT筛选。

验证基础：我们通过四次独立的融合实验，使用新鲜制备的小鼠脾脏，对 NS-1 和 SP2/0 这两种小鼠骨髓瘤融合伴侣进行了评估。

2. 使用Hybriboost有助于提高杂交瘤细胞单株化成功率

在显微镜下，我们对孔内存活杂交瘤集落的数量进行了目视计数。使用Hybriboost时，单克隆化成功率相较于常规方法有明显提升。

对比数据：Hybriboost方案的成功率可达高水平（接近100%），优于常规FCS培养基（10%-40%）和饲养层培养基（50%-80%）组。

3. Hybriboost化学成分限定，不影响抗体生产产量与质量

Hybriboost 不会改变杂交瘤细胞分泌抗体的产量。Hybriboost是一种化学成分明确的试剂，不含任何动物源性材料，不会对细胞生理功能产生影响。

我们选择了杂交瘤细胞克隆（抗人转铁蛋白，L3B5），在三种培养基中（含 Hybriboost 的 FCS 培养基、含饲养层的 FCS 培养基、常规 FCS 培养基）培养七天。随后收获上清液，并通过 ELISA 测定 分泌性抗体（Ab）的效价。

Hybriboost建议添加时间

1、可用于杂交瘤细胞的筛选阶段，添加到HAT培养基

2、可用于杂交瘤细胞单克隆化的过程中，用以维持单细胞克隆的良好生长

3、可作为常规添加剂用于已建立的杂交瘤细胞的日常培养（杂交瘤抗体发现相关实验中）

产品规格

参考文献

1. Li, CJ., Huang, PH., Chen, HW. et al. Development and characterization of mouse monoclonal antibodies targeting to distinct epitopes of Zika virus envelope protein for specific detection of Zika virus. Appl Microbiol Biotechnol (2021).

2. Lai, Guan-Chun, et al. "Neutralization or enhancement of SARS-CoV-2 infection by a monoclonal antibody targeting a specific epitope in the spike receptor-binding domain." Antiviral Research 200 (2022): 105290.

3. Su, Shih-Chieh, et al. "Structure-guided antibody cocktail for prevention and treatment of COVID-19." PLoS Pathogens 17.10 (2021): e1009704.

4. Lu, Ruei-Min, et al. "Monoclonal antibodies against nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 variants for detection of COVID-19." International Journal of Molecular Sciences 22.22 (2021): 12412.

5. Ko, Shih-Han, et al. "Monoclonal antibodies against S2 subunit of spike protein exhibit broad reactivity toward SARS-CoV-2 variants." Journal of Biomedical Science 29.1 (2022): 108.

Hybriboost促杂交瘤生长剂Q&A

Q1：Hybriboost 主要作用是什么？适合哪些杂交瘤细胞培养场景？

A1：Hybriboost 是化学成分明确的杂交瘤细胞生长补剂（杂交瘤抗体发现实验相关试剂），核心作用是提升杂交瘤细胞的克隆效率、单克隆化成功率及存活率，且不影响抗体产量与质量。适用于三大核心场景：①杂交瘤细胞筛选阶段（添加至 HAT 培养基）；②杂交瘤细胞单克隆化过程（维持单细胞克隆生长）；③已建立杂交瘤细胞的日常培养-杂交瘤抗体发现（可梯度稀释 2-4 倍使用）。

Q2：使用 Hybriboost 后，目的阳性克隆的绝对数量一定会增加吗？

A2：不一定直接增加目的阳性克隆绝对数，但能明显提升整体杂交瘤细胞存活率。融合细胞中包含阴性克隆，需经 HAT 筛选及 PCR 确认后才是阳性克隆。Hybriboost 可帮助目的克隆在筛选前存活，提升其度过筛选阶段的概率，相比未使用产品，能为阳性克隆筛选提供更充足的细胞基础。

Q3：Hybriboost 相比常规培养基、饲养层培养基，核心优势是什么？

A3：核心优势体现在三方面：①效率更高：克隆融合效率较常规培养基提升明显，NS-1 融合细胞在 96 孔板中可达 1000-1500 个（是常规培养基的 10 倍以上），单克隆化成功率接近 100%（常规培养基 10%-40%、饲养层培养基 50%-80%）；②成分更安全：化学成分完全限定，无动物来源成分、无血清、无蛋白，不会引发细胞依赖，也不影响细胞生理功能；③适用性更广：无需依赖饲养层细胞，可适配多种基础培养基（如 DMEM、RPMI-1640 等），兼容不同杂交瘤细胞培养体系。

Q4：Hybriboost 的规格是多少？如何配制使用？

A4：产品规格为 0.05g / 瓶，可配制 1L 培养基。提供两种便捷配制方法：方法一：①用 5mL 双蒸水溶解粉末；②与 1L 常规细胞培养基混合均匀；③经 0.22μm 滤器过滤除菌后使用。方法二：①用 1mL 双蒸水溶解粉末；②经 0.22μm 滤器过滤除菌；③将过滤后溶液与已经过滤的 1L 常规细胞培养基混合均匀即可。备注：可适配含 10% FCS 及抗生素的基础培养基，实际可按自身培养基体系调整。

Q5：Hybriboost 的保存条件是什么？有效期多久？

A5：①未开封产品：2-8℃避光保存，有效期 24 个月；②配制于双蒸水中后：-20℃保存，不超过 3 个月；③配制于培养基中后：2-8℃保存，不超过 2 周。建议按使用量分批配制或者配置后分装，避免反复冻融影响效果。

Q6：Hybriboost 可以和其他添加剂、培养基搭配使用吗？

A6：可以。Hybriboost 兼容性强，可与 HAT 培养基、常规细胞培养基（如 DMEM、RPMI-1640）及常用抗生素等添加剂搭配使用，不会产生成分冲突，也不影响其他试剂的功能发挥。

Q7：Hybriboost 与同类竞品相比，优势在哪里？

A7：相比同类竞品，核心优势有三点：①价格更具竞争力，比同类产品优惠10%-20%不等，批量采购额外再享折扣；②成分更安全纯净：无动物源性成分、无血清、无蛋白，避免杂蛋白干扰和潜在生物安全风险，而部分竞品含动物来源成分或未明确成分；③使用更灵活：无需调整现有培养体系，单克隆化、日常培养等多场景通用，部分竞品仅适用于特定阶段（如融合或亚克隆）。

Q8：使用过程中遇到技术问题，如何获取支持？

A12：可通过以下方式获取技术支持：

①电话咨询：021-5176 9110；

②邮件咨询：sales@mine-bio.com；

③官网咨询：点击页面 “在线咨询”，客服将在线解答，如若遇到非工作时间，可点击右侧 “问题留言” 窗口，我们将在 1-2 个工作日内回复，提供配制指导、使用场景适配、问题排查等专业服务。

Q9：杂交瘤细胞两次筛选分别指什么？Hybriboost在两次筛选中分别能发挥什么作用？

A9：杂交瘤细胞的两次筛选是单克隆抗体制备的核心环节：

第一次为HAT选择性存活筛选：通过HAT培养基的代谢压力，去除未融合的亲本细胞，仅保留杂交瘤细胞。此阶段添加Hybriboost可提升细胞在筛选压力下的存活率，增加可筛选集落数，降低阳性克隆丢失风险。

第二次为抗体特异性筛选：通过ELISA、Western Blot等方法，筛选出能分泌目标抗体的阳性克隆。后续单克隆化阶段添加Hybriboost可大幅提升单细胞增殖能力与存活率，确保珍贵阳性克隆稳定扩增。

Q10：杂交瘤细胞的核心特点是什么？这些特点对培养和筛选有什么特殊要求？

A10：杂交瘤细胞的核心特点是兼具B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力和骨髓瘤细胞无限增殖的能力，但新融合的杂交瘤细胞稳定性差、对培养环境高度敏感，尤其是在筛选和单克隆化阶段，细胞存活率低。