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BioLamina人类重组层粘连蛋白 
发布时间：2026/05/11 点击数：4 Polysciences丨PEI转染试剂丨293T丨Expi293丨CHO-S蛋白抗体瞬转
本文摘要
本文针对重组蛋白与抗体瞬时转染的核心痛点，系统介绍Kyfora Bio by Polysciences全系列PEI转染试剂的产品特性与性能优势。提供主流细胞系的标准化转染操作流程，涵盖试剂配制、参数优化等关键环节，解答用户高频疑问，助力科研人员实现稳定、可放大的蛋白抗体表达。
关键词
Polysciences、PEI转染试剂、293T、Expi293、CHO-S、蛋白抗体瞬转、Transporter 5、PEI MAX、MAXgeneGMP、病毒包装
一、蛋白抗体瞬转的核心挑战
重组蛋白与单克隆抗体的瞬时表达是生物制药研发与基础科研的关键环节，转染试剂的性能直接决定表达效率与实验重复性。目前主流转染方法普遍存在以下痛点：
转染效率低：特别是对CHO-S等难转染细胞系，难以获得高产量蛋白
细胞毒性大：转染后细胞活率大幅下降，影响后续表达量
批次不稳定：不同批次试剂性能差异大，实验结果难以重复
放大困难：小试效果好，但放大至升规模后效率大幅降低
合规性不足：缺乏符合GMP要求的临床级产品，无法支撑细胞与基因治疗研发
PEI（聚乙烯亚胺）作为阳离子聚合物转染试剂，凭借高性价比、易放大、低细胞毒性等优势，已成为蛋白抗体瞬转与病毒包装的主流选用试剂。其中，Polysciences（现Kyfora Bio）的PEI转染试剂凭借数十年的技术积累，在全球范围内获得普遍应用。
二、Polysciences PEI转染试剂核心性能优势
Polysciences PEI转染试剂采用线性聚乙烯亚胺结构，通过将DNA缩聚成带正电荷的复合物，介导细胞内吞，并能有效抵御溶酶体降解，大幅提升转染效率。其核心优势如下：
2.1高转染效率，适配主流细胞系
在293T、Expi293、CHO-S等主流蛋白表达细胞系中均表现出优异的转染性能，抗体表达量明显高于同类竞品。
图1.Polysciences PEI与竞品在HEK和CHO细胞中的抗体表达量对比
（左：HEK细胞mAb表达量；右：CHO细胞mAb表达量，转染后8天检测）
2.2低细胞毒性，维持高细胞活率
独特的分子结构设计在保证转染效率的同时，大幅降低细胞毒性，转染后细胞活率可维持在90%以上，有利于蛋白的持续稳定表达。
2.3批次稳定，可线性放大
严格的生产工艺与质量控制体系确保每批次产品性能一致，支持从96孔板到数千升生物反应器的线性放大，无明显效率损失。
图2.MAX gene GMP批次稳定性数据，三批MAXgeneGMP转染悬浮HEK-293T细胞，24h、48h、144h细胞增殖情况一致
2.4全流程产品覆盖，无缝衔接临床
提供从科研级到临床级的完整产品矩阵，支持从早期基础研究到临床申报与商业化生产的全流程需求。
三、全系列产品选型指南
Polysciences提供不同级别的PEI转染试剂，满足不同研发阶段的需求：
图3.Polysciences提供不同级别的PEI转染试剂
| 注：2025年起，Polysciences转染与递送业务正式由KyforaBio独立运营，产品配方与质量标准保持不变，上海曼博生物为中国区独家授权供应商。 |
四、标准化转染操作流程
以下操作流程均来自Polysciences官方使用手册，严格遵循可获得理想实验效果。
4.1试剂准备与配制
4.1.1储存条件
未开封粉末：室温短期保存，2-8℃长期保存，有效期2年，不可冷冻
配制好的PEI MAX溶液：2-8℃保存，6个月内良好性能，使用周期可达1年
配制好的PEI 25K溶液：-20℃分装保存，有效期1年，解冻后2-8℃保存，2周内用完
Transporter 5即用型溶液：2-8℃保存，有效期见产品标签
4.1.2 PEI粉末配制方法（1mg/mL）
以PEI MAX（货号24765-1）为例：
将1g PEI MAX加入盛有900mL分子生物学级水的玻璃烧杯中
加入磁力搅拌转子，低速搅拌至完全溶解（约5-10分钟）
逐滴加入1N氢氧化钠，调节pH至6.3-6.7（兼容pH7.1）
加水定容至1L，再次确认pH值
用0.22μmPES滤膜无菌过滤
分装至无菌HDPE或PP瓶中，2-8℃保存
| ⚠️注意：避免使用聚碳酸酯（PC）瓶储存PEI溶液；严禁反复冻融。 |
4.2贴壁细胞（293T）转染流程
适用于293T等贴壁细胞的蛋白表达与慢病毒包装。
4.2.1转染前准备
转染前18-24小时铺板，使转染时细胞汇合度达到85-90%
确保细胞状态良好：传代不超过20代，无支原体污染，活力>95%
质粒DNA要求：无内毒素，OD260/280=1.8-2.0，浓度>0.5mg/mL
4.2.2标准转染步骤（以12孔板单孔为例）
1. 转染前1-2小时，去除旧培养基，用PBS洗涤1次，更换为0.9mL含2-5%血清的新鲜培养基
2. 制备PEI-DNA复合物：
管A：50μL稀释液+0.75μg质粒DNA，轻轻混匀
管B：50μL稀释液+1.5μL1mg/mLPEI溶液，轻轻混匀
将管B缓慢滴加到管A中，涡旋5秒，室温孵育15分钟（不可超过20分钟）
3. 将100μL复合物逐滴加入细胞孔中，轻轻晃动培养板使其均匀分布
4. 37℃、5%CO₂培养箱中培养
5. 转染后18-24小时更换为含10%血清的完全培养基
6. 转染后24-48小时检测蛋白表达，72-96小时收集上清获得理想产量
4.3悬浮细胞（Expi293/CHO-S）转染流程
适用于Expi293F、CHO-S等悬浮细胞的大规模蛋白抗体表达。
4.3.1转染前准备
转染前18-24小时接种细胞，使转染时密度达到2×10⁶cells/mL，活率>95%
摇瓶培养体积不超过容器容积的30%，转速120-150rpm
4.3.2标准转染步骤（以250mL摇瓶，50mL终体积为例）
1. 转染当天，确认细胞密度与活率，调整体积至45mL
2. 制备PEI-DNA复合物：
管A：2.5mL稀释液+100μg质粒DNA，轻轻混匀
管B：2.5mL稀释液+200μL1mg/mLPEI溶液，轻轻混匀
将管B缓慢滴加到管A中，涡旋5秒，室温孵育15分钟
3. 将5mL复合物逐滴加入摇瓶中，轻轻晃动摇瓶
4. 37℃、5%CO₂、120rpm培养，无需换液
5. 转染后72-96小时收集上清，检测蛋白表达量
五、关键参数优化指南
为获得理想转染效率与蛋白产量，建议针对具体细胞系与实验目的优化以下参数：
5.1DNA:PEI比例优化
推荐优化范围：1:1~1:4（质量比）
重组蛋白/抗体表达：推荐1:3
AAV病毒包装：推荐1:2
慢病毒包装：推荐1:3
5.2细胞密度优化
贴壁细胞：转染时汇合度70-90%
悬浮细胞：转染时密度1-6×10⁶cells/mL
低密度（1-2×10⁶）：质粒用量1-2μg/10⁶细胞
高密度（3-6×10⁶）：质粒用量0.4-0.8μg/10⁶细胞
5.3复合物孵育时间
恰当孵育时间：10-20分钟
孵育时间过短：复合物形成不充分
孵育时间过长：复合物团聚，转染效率下降
5.4稀释液选择
推荐使用：150mMNaCl溶液、Opti-MEM无血清培养基、无血清DMEM
禁止使用：含血清或抗生素的培养基作为稀释液
六、常见问题（FAQ）
Q1：转染效率低的常见原因有哪些？
细胞状态差：传代次数过多、支原体污染、细胞结团
质粒质量差：内毒素含量高、OD260/280不在1.8-2.0范围
DNA:PEI比例不合适：需在1:1~1:4范围内优化
复合物孵育时间过长或过短
转染时细胞密度过高或过低
Q2：转染后细胞毒性大怎么办？
适当降低PEI用量，优化DNA:PEI比例
转染后4小时更换新鲜培养基
确保质粒DNA无内毒素污染
避免细胞过度汇合时转染
Q3：PEI溶液可以-20℃保存吗？
PEI 25K溶液：可以-20℃分装保存，有效期1年
PEI MAX溶液：不建议-20℃保存，2-8℃保存可稳定6个月
Transporter 5溶液：2-8℃保存，不可冷冻
Q4：转染时可以加抗生素吗？
不可以。PEI转染会增加细胞通透性，抗生素会进入细胞导致细胞死亡。转染前和转染后24小时内培养基中不应添加抗生素。
Q5：MAX gene GMP可以用于临床申报吗？
可以。MAX gene GMP在ISO13485质量管理体系下生产，提供完整的DMF文件、CoA报告、验证报告等申报所需资料，目前国内外已有多个项目使用该产品进入临床阶段。
七、产品供应与技术支持
上海曼博生物医药科技有限公司是KyforaBio by Polysciences中国区官方独家供应商，提供全系列PEI转染试剂及专业技术支持（https://www.mine-bio.com/Kyfora Bio by Polysciences/）：
现货供应PEI MAX、PEI 25K、Transporter 5、MAXgeneGMP全系列产品
提供完整的产品说明书、质检报告及技术方案
转染实验技术咨询与工艺优化指导
本文基于Kyfora Bio by Polysciences公开资料由其中国提供商上海曼博生物整理，仅用于科研信息分享。上海曼博生物可提供Kyfora Bio by Polysciences PEI转染试剂、PEI MAX、PEI 25K、Transporter 5、MAXgeneGMP等产品与技术支持，助力293T、Expi293、CHO-S蛋白抗体瞬转、病毒包装及细胞与基因治疗相关研究。
