细胞因子/生长因子的质量是细胞培养体系的核心调控基石，其纯度（如≥95% 无杂质残留）直接决定细胞信号传导的准确性，内毒素水平（≤0.5 EU/μg）超标会诱发细胞炎症反应或凋亡；生物活性批间差异（如 ED50 波动≤10%）会影响实验数据重复性与工艺放大稳定性；而生产工艺中的动物源成分残留（如无血清/无动物源认证）可能引入病原体风险，破坏培养体系安全性。高质量细胞培养添加剂通过准确模拟内源性调控网络，确保细胞在增殖、分化、代谢等生命活动中维持天然表型与功能，这对科研实验的可重复性、工业生产的产量一致性以及细胞治疗等临床应用的合规性均具有决定性意义。

以下是研究人员在选择和使用重组蛋白因子时，经常关注和询问的一些问题。由于篇幅有限，我们整理了其中几个常见问题，供大家参考。

高频问题一、为什么要关心重组蛋白因子的来源？ 

重组蛋白因子可以在原核细胞（较常见的是大肠杆菌）或真核细胞中合成，使用细胞系，例如人胚胎肾 (HEK) 293 细胞或中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞。这些细胞来源各有优势。与真核系统相比，原核来源产生的蛋白质通常批次间差异较小且纯度更高。它们还具有不含动物成分的额外优势，消除了污染生长因子、病毒、朊病毒和其他动物源成分的风险。这种生产方法还减少了对胎牛血清 (FBS) 的需求。

然而，当涉及到复杂的全长哺乳动物蛋白质时，原核系统可能会有所不足；蛋白质重折叠和翻译后修饰可能与真核系统不同，这会影响蛋白质的溶解度和活性。对于来自原核和真核来源的生长因子，请务必在购买前检查生物活性数据。

生长因子生产方面的创新使得越来越多的蛋白质能够使用原核系统生产，并且这些蛋白质无需动物来源，同时保持正确的折叠和活性。Qkine lead这一潮流，其产品包括：TGF-β1 PLUS，shouge完全不含动物来源的 TGF-β1，以及人类R-spondin 1和R-spondin 3的生物活性片段，还有Qkine品牌下的100多种重组蛋白产品，均在非动物源环境下生产，不含动物源成分，减少变异性，防止交叉污染；并且可提供全面的可追溯性和文件记录，以支持未来的细胞治疗和监管流程。尤其是，Qkine可生产市面上独特的无动物源重组蛋白产品HGF、TGF-β1和DKK1。

图1：Qkine高生物活性无动物来源(AOF)的 DKK-1

高频问题二、内毒素会引起什么问题？什么水平的内毒素污染是可以接受的？ 

内毒素是小的疏水性脂多糖分子，是革兰氏阴性细菌外细胞膜中发现的一种有毒物质。细菌在细胞死亡或活跃生长和分裂时会释放内毒素。内毒素会影响细胞培养物的生长或性能，是实验差异的主要来源。内毒素具有非常高的热稳定性，这意味着它们无法通过高压灭菌等常规净化方法破坏。内毒素也是疏水性的，因此对其他疏水性材料（如实验室塑料）具有很强的亲和力。可以通过清洁和适当的实验室技术来避免内毒素，以控制实验室中的内毒素水平。

在Qkine内部，他们通过良好的无菌技术、制造过程中使用的缓冲液通过过滤灭菌和严格的净化柱清洁流程来实现了这一点。这将较大限度地减少内毒素进入任何制造/研究过程。并通过鲎变形细胞裂解物 (LAL) 检测法确定内毒素水平。该检测法可以检测到少至 0.01 内毒素单位 (EU)/mL（1 EU约等于 0.1-0.2 ng 内毒素/mL溶液）。

当前行业标准要求生长因子批次中的内毒素水平低于 0.5 EU/mL（值越低越好），但Qkine 重组蛋白因子的质量标准中要求每 µg 蛋白质内毒素含量低于 0.1 EU，数值远低于于当前行业标准要求的≤0.5 EU/mL。这也体现Qkine对因子质量的承诺。

图2：Qkine因子TGF-b1 PLUS（货号Qk010）#204573批次部分CoA数据展示，红色框分别为内毒素和纯度检测数据。如想看Qkine产品完整CoA，可联系曼博生物技术支持获取

高频问题三、Qkine的生长因子活性是否高于或低于其他供应商的蛋白质？ 

作为Qkine因子生物活性保证的一部分，Qkine与当前主要供应商进行定量对比的生物活性研究，以确保Qkine的蛋白质生物活性相当或更优。在Qkine的研发过程中，他们始终会在重溶后校正蛋白质浓度，以确保进行公平对比，并纠正瓶内回收率的任何差异。（通过查阅您感兴趣的Qkine因子的技术说明，可以获取生物活性比较数据）

示例如下所示：IL-6 是一种多功能细胞因子，调节免疫反应和炎症，其常用于培养免疫细胞和造血干细胞。验证结果显示Qkine 的 IL-6 不含动物来源，无标签和载体，且生物活性更高。

图3：Qkine的IL-6（绿色，Qk093）的生物活性高于来自同类供应商的蛋白（供应商 B，黑色）。

高频问题四、为什么Qkine的蛋白质不含标签很重要？

首先，我们来了解下标签序列。通常重组蛋白可以通过添加一个短的氨基酸序列来“标签化”，这个序列在自然界中不存在，因此可以更容易地从复杂的混合物中纯化蛋白质。其他常用的蛋白标签还可以用于后期的蛋白修饰，如生物素化、与其他蛋白质偶联以进行后续的生化实验，或在蛋白表达过程中优化折叠或产量。

为了提高依赖重组蛋白的实验可重复性和可靠性，包括生化检测和细胞培养（这些蛋白通常是细胞培养基的关键成分），除非应用特别要求带标签的蛋白，否则使用无标签蛋白是十分重要的。

大多数蛋白标签较小，因此通常认为它们对蛋白质的影响很小或没有影响。然而，文献中有几个案例表明，标签可能改变蛋白质的行为，有时会带来严重后果。即使是一个小的蛋白标签，也很难预测它对蛋白质功能的影响。在临床或细胞农业（如培养肉、鱼、脂肪和乳制品）细胞制造的背景下，标签的存在可能会带来更严重的后果，因为它们引入了非自然的氨基酸序列，这些序列可能具有过敏性，因此可能会受到监管机构的额外审查。

Qkine的重组蛋白都不含蛋白标签，但在为客户定制生产Avi-tag activin E PLUS时，厂家发现其生物活性相比无标签版本有所下降，EC50提高了10倍（如下图所示），提供了由于小的N端蛋白标签存在导致蛋白活性变化的直接实验证据。

图3：Avi标签活性素E PLUS与无标签活性素E PLUS的生物活性比较。重组活性素E PLUS的活性通过在HEK293细胞中使用Smad报告基因实验进行测定，细胞与活性素E共受体ALK7共同转染。细胞被处理三次，分别加入梯度稀释的活性素E PLUS（Qk067）或Avi标签活性素E PLUS（Qk082），处理时间为6小时。荧光素酶活性被测量并归一化到对照组的Renilla荧光素酶活性。在活性素E PLUS的N端添加Avi标签使得EC50约增加了10倍，从0.09 ng/ml增加到1 ng/ml。

总的来说：

•  标签可能会影响蛋白质的折叠和结构，从而影响蛋白质功能和生物活性

•  杂质可能会与标签蛋白一起纯化

•  带标签的重组蛋白不适用于受监管的应用，如细胞治疗制造和细胞农业

•  当某个特定实验应用需要特定标签时，确保蛋白质的均一性和生物活性是十分重要的。

高频问题五、如何储存生长因子？

生长因子的保质期受多种因素影响，包括储存状态、缓冲液成分、储存温度和蛋白质本身的稳定性。一般而言，冻干的生长因子最稳定。

冻干蛋白质通常在室温下稳定一个月（验证可在室温下稳定保存 3 天），或在 -20℃ 或 -80℃ 下冷冻 2 年。

补充：针对 TGF beta 家族（包括 Activins、BMP 和 GDF15）的特别指导TGF beta 家族蛋白和其他生长因子在生理溶液中的溶解度非常低。请遵循以下冻干细胞因子的处理指南，以尽量减少因沉淀或吸附到塑料上而导致的蛋白质损失。我们建议在细胞培养基或终工作溶液中稀释之前，将重组蛋白储存在非常低的 pH 值下。低 pH 值还将有助于通过较大限度地减少二硫键交换反应来保持蛋白质的正确二硫键结构。

1. 在生理缓冲液中重新悬浮可能会导致原液沉淀，因此我们建议将冻干细胞因子溶解在 10 mM HCl（浓 HCl 的 1:1000 稀释度）中，同时保持蛋白质浓度在 50 µg/ml 或以上，以避免因吸附到塑料器皿上而造成损失。

2. 为了确保恢复全部蛋白质，让样品在室温下与溶解缓冲液一起静置几分钟，然后轻轻上下移液（避免起泡）。

3. 用更多的 10 mM HCl 冲洗试管并将其与剩余物汇集在一起。

4. 蛋白质可以耐受一定程度的冻融循环，但与蛋白质一样，建议分装并冷冻保存。

5. 曼博生物提供的Qkine因子不含载体蛋白的蛋白质。如果与您的工作兼容，请添加您选择的载体蛋白，如 BSA、HSA 或明胶，以进一步减少吸附损失。

6. 长期储存温度为-80℃。短期储存温度为-20℃。

Qkine高纯度高活性蛋白：「长期主义」背后的品质逻辑

九项Qkine质量承诺概括了以客户应用为先的价值主张：

1. 认证的无动物源成分，具有全面的可追溯性

2. ISO 9001:2015制造设施中生产

3. 准确的蛋白质从小瓶中回收

4. 定量生物活性分析，集成批次间可重复性

5. 较高的蛋白纯度水平（国产一般是95%，Qkine>98%）

6. 针对结构复杂的生物活性蛋白进行全面的身份分析

7. 较高的低内毒素水平 <0.005 EU/μg protein belowlevel of detection)

8. 严格测试无菌性和无支原体

9. 设计驱动的蛋白质质量

Qkine秉持产品质量承诺的同时，也收获了客户一致好评和复购！

在细胞治疗竞速、类器官新药崛起的当下，“准确、稳定、可复现” 的细胞因子，既是科研突破的催化剂，也是产业转化的压舱石。当越来越多客户感慨 “终于找到不用‘试错’的因子” 时，这背后，正是曼博与Qkine对 “科研级品质” 的坚守。

QKine总部位于英国剑桥，是专业的生物活性重组蛋白制造商。客户遍布全球几十个国家。其重组蛋白技术源于剑桥大学，由科学家带领和运营，其主要领导团队来自抗体蛋白品牌商Ab。致力于解决批次不稳定、动物源污染、低活性等行业痛点，提供无动物源、高纯度和高活性的重组蛋白因子。上海曼博生物是QKine在中国地区的官方授权代理商。

曼博生物&Qkine重组细胞因子——让细胞实验的每一步，都更可控

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