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Transporter 5 Transfection Reagent

  • 品牌:polysciences

  • 品名:Transporter 5 Transfection Reagent

  • 型号:26008-50

  • 规格:50ml

  • 目录价:16369

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产品简介

Transporter 5转染试剂是一种GMP等级的即用型线性聚乙烯亚胺(PEI转染试剂)溶液,由PEI MAX配置而成,采用0.1um PES无菌过滤器,完全消除支原体污染风险。Transporter 5将DNA缩聚成带正电荷的复合物,这些复合物很容易通过内吞作用进入细胞,并且Transporter 5-DNA 复合物能很好地抵御溶酶体的降解作用,有效提高转染效率。适用于工艺开发、临床前和早期临床研究,可无缝过渡到MAXgene GMP于商业化生产。

 

Transporter 5转染试剂能高效地将DNA转染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆虫(SF9、SF21) 等真核细胞系可作用于大到135,000个核苷酸的质粒,所以较大的质粒也可以成功地转染。 


Transporter 5可节省试剂准备时间,加快项目进度。经过严格的性能检测,确保品质,在新药研发过程中是一款快速、重复性好、可用于批量产的转染试剂。


产品特点

l非GMP,研究级PEI转染试剂溶液

l高转染效率

l无缝过渡到MAXgene GMP

l易放大,可预测产量

l用于工艺开发,临床前和早期临床研究

 

转染示意图

含血清培养的贴壁细胞转染流程

1. 准备工作

• 转染前 18~24 小时细胞铺板。

• 在培养基中加入合适数量的细胞,以确保在转染前形成 60~80%汇合度的单细胞层,此为最理想的细胞转染密度。

各规格培养容器中贴壁细胞铺板密度参考表


2. 转染步骤(以 6 孔板单孔举例)

• 转染前 1~2 小时,将需要转染的孔中的培养基替换成 3 mL 新鲜的含有2%低血清或无血清的培养基。(高浓度血清抑制 Transporter 5 的性能,大多数情况下,较低的血清含量(≤ 5%)或无血清将获得较高的转染效率)。

• 准备Transporter 5-DNA 转染混合物(以下操作顺序尤为关键)。

1) 在含有300uL(3mL的10%)稀释液的聚丙烯 EP 管中加入 2ug质粒 DNA;

2) 轻轻地混匀/振荡溶液;

3) 在 DNA 溶液中加入 2~8 uL Transporter 5 转染试剂(Transporter 5-DNA 的比例建议在 1~4:1 之间优化,首次推荐使用 2:1 或 3:1);

4) 涡旋振荡 5 秒钟;

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟,使 Transporter 5-DNA 复合物形成(建议共孵育时间不超过 20 分钟);

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次

• 边晃动细胞培养板,边将 Transporter 5-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中,确保 Transporter 5-DNA 复合物均匀分布,防止局部浓度过高。


3. 孵育培养

  • 将细胞培养板放入培养箱培养 18~24小时后,更换含有血清的正常培养基;

  • 通常,在转染后 36-48 小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒,转染后 72-96 小时可观察到最大产量。


经过驯化的无血清培养悬浮细胞转染流程

1.准备工作

 转染前 2~3 小时,种植细胞密度为 1X106 /mL 于培养容器中。


2. 转染步骤(以 250 mL 摇瓶为例,转染前种植细胞总体积为 25 mL,最终总培养体积为 50 mL)

准备 Transporter 5-DNA 转染混合物(以下操作顺序尤为关键)。

1)在含有 2.5 mL(25mL 的 10%)稀释液的聚丙烯 EP 管中加入 50ug 质粒 DNA(质粒用量建议在 1~2ug/106 细胞之间优化,此处使用 2ug/106 细胞)

2) 轻轻地混匀/振荡溶液

3) 在 DNA 溶液中加入 50~200uL Transporter 5 转染试剂(Transporter 5/DNA 的比例建议在 1~4:1 之间优化,首次推荐使用 2:1 或 3:1)

4) 涡旋振荡 5 秒钟

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟,使 Transporter 5-DNA 复合物形成(建议共孵育时间不超过 20 分钟)

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次

注:边晃动摇瓶,边将 Transporter 5-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中,确保Transporter 5-DNA 复合物均匀分布,防止局部浓度过高。


3. 孵育培养

将细胞培养瓶放入培养箱,摇瓶培养 2~3 小时后,加入 25 mL 新鲜培养基,继续培养。

通常,在转染后 36-48 小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒。转染后 72-96 小时可观察到最大产量。

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